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PCR實驗室如何設計,安裝步驟

  • Jason Peng

  • Product Manager for PCR實驗室如何設計,安裝步驟,Engaged in related product development for 15 years,with a wealth of related technical experience

  • 2022-12-05  |  Visits:


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PCR實驗室凈化系統(tǒng)設計要求

PCR實驗室又叫基因擴增實驗室。PCR是聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction)的簡稱。是一種分子生物學技術,用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復制。通過DNA基因追蹤系統(tǒng),能迅速掌握患者體內的病毒含量,其精確度高達納米級別。
當前,PCR實驗室廣泛應用于醫(yī)院及各疾病預防控制中心的疫病檢驗,2010年,衛(wèi)生部辦公廳制定并發(fā)布了《醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》以及《醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室工作導則》(以下簡稱導則)。導則規(guī)定了pcr實驗室設計的基本原則,原則上PCR實驗室需設置4個區(qū)域∶試劑儲存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū),各個分區(qū)具體設備配置也各有不同。
PCR實驗室設置的4個區(qū)域主要設備配置:
試劑儲存和準備區(qū):冷凍冷藏冰箱、超凈工作臺、臺式離心機、掌上離心機、微孔板離心機、可移動紫外燈、混勻器、田平、微量加樣器等;
標本制備區(qū):2~8℃冰箱、低溫冰箱或超低溫冰箱、生物安全柜、高速離心機、均質儀、核酸提取儀、蒸汽滅菌器、超微量紫外分光光度計、過氧化氫消毒劑、金屬浴、水浴箱等;
擴增區(qū):普通PCR儀、熒光定量PCR儀、數(shù)字PCR儀、質譜儀、微量加樣器、低溫冰箱、可移動紫外燈等;
產(chǎn)物分析區(qū):凝膠成像系統(tǒng)、電泳系統(tǒng)、微量加樣器、可移動紫外燈等。
PCR實驗室四個區(qū)域要求:空氣不能直接相通
根據(jù)導則要求,PCR 實驗室各個區(qū)域無論在空間上還是使用中必須完全獨立,不能有任何空氣的直接相通。空氣流向可按照:試劑儲存和準備區(qū)——標本制備區(qū)——擴增區(qū)——產(chǎn)物分析區(qū)壓力遞減的方式進行,防止各區(qū)域空氣的交叉污染。
PCR實驗室設計核心:各區(qū)域壓力梯度控制
PCR 反應的最大特點就是極高的靈敏性,極其微量的污染就會造成 PCR 實驗結果的假陽性,因此組合型 PCR 實驗室設計的核心問題就是避免交叉污染,而組合型 PCR 實驗室的平面布局模式及各區(qū)域的壓力梯度控制成為了解決這一核心問題的關鍵。
PCR實驗室空調系統(tǒng):嚴格控制送排風比例
現(xiàn)行國家標準《疾病預防控制中心建筑技術規(guī)范》GB 50881 對 PCR 實驗室的各項設計參數(shù)進行了規(guī)范與要求,PCR實驗室各區(qū)域并沒有凈化控制要求,但為了避免交叉感染,通常采用全送全排的直流空調系統(tǒng),并且需要嚴格控制好送風、排風的比例,保證各實驗區(qū)域的壓力梯度。
PCR實驗室暖通:獨立的全新風
組合型PCR實驗室的空調負荷、換氣次數(shù)等要求與二級生物安全實驗室原則一致。PCR實驗室的暖通空調系統(tǒng)需設置獨立的一套全新風空調系統(tǒng),PCR實驗室并無空氣凈化的強制性要求,因此只需要設置初效加中效過濾器即可,不同房間的排風宜設置止回裝置,排風機吸入側設置活性炭等生物凈化裝置。
PCR緩沖間:雙向保護屏障
組合型 PCR 實驗室應設置緩沖間,緩沖間在實驗核心區(qū)與專用走廊區(qū)域形成一道雙向保護屏障,既阻止外部環(huán)境的潛在污染物質如氣溶膠等進入實驗核心區(qū),同時又控制核心實驗(產(chǎn)物分析)的有害物質滲入環(huán)境,對實驗區(qū)外部環(huán)境及內部試劑均起到了保護作用。
本文節(jié)選自《二級生物安全實驗室設計建造與運行管理指南》

PCR實驗室設計效果圖 PCR實驗室設計效果圖
   

PCR實驗室設計的差壓設定

PCR實驗室
來把DNA片段擴增到百萬倍以上,來達到實驗的技術要求。
PCR實驗室設計中一般分為試劑配制區(qū)、樣品處理區(qū)、核酸擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)4個獨立的功能區(qū)??紤]到試劑配制、樣品處理的污染性,為了避免出現(xiàn)污染,實驗室的壓差梯度為:試劑配制>樣品處理>擴增>產(chǎn)物分析,考慮到實驗室的工作內容,可以把試劑配制區(qū)、樣品處理區(qū)定為微正壓區(qū),核酸擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)定為微負壓區(qū)。這樣就保證各個區(qū)域之間具備單向的實驗工藝、物、人與氣,形成單向流程的保護屏障,避免實驗之間的相互干擾,防止核酸氣溶膠對實驗過程造成污染產(chǎn)生假性結果。
常見的區(qū)域壓力有哪些設定方式呢?
第一:所有的緩沖間相對于區(qū)域房間內外,自身都是正壓狀態(tài),例如實驗室走廊設定10Pa,緩沖間為15Pa,試劑配制到產(chǎn)物分析依次可分別設定為10Pa、5Pa、-5Pa、-10Pa,整個緩沖間的空氣流向都是自內向外吹,這樣既能保證主實驗區(qū)的壓力梯度,又能有效避免實驗室走廊和各實驗區(qū)的交叉氣流污染;
第二:所有緩沖間相對于區(qū)域房間內外,自身都是負壓狀態(tài),例如實驗室走廊還設定10Pa,緩沖間為-15Pa,試劑配制到產(chǎn)物分析依次可分別設定為10Pa、5Pa、-5Pa、-10Pa,整個緩沖間的空氣流向都是自外向內吹,這樣也能保證主實驗區(qū)的壓力梯度,又能有效避免實驗室走廊和各實驗區(qū)的交叉氣流污染;
第三:緩沖間與實驗區(qū)保持一致的壓力梯度,例如試劑配制到產(chǎn)物分析如果依次分別設定為10Pa、5Pa、-5Pa、-10Pa,那么相應的緩沖間則應分別設定為:15Pa、10Pa、5Pa、-5Pa,這樣根據(jù)風的壓力流向,實驗室的前區(qū)和后區(qū)也不會做到相互污染。
無論緩沖間采用哪種壓力設定,只要是能達到有效隔離實驗室內外交互污染,就是起到了緩沖間作用,另外緩沖間一般建議采用互鎖系統(tǒng),這樣能更有效地阻止氣流組織的相互混流。

PCR實驗室設計效果圖 PCR實驗室設計效果圖
   

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